原代大鼠卫星胶质细胞(Primary Rat Satellite Glial Cells (SGC) ) 分离自8~9周的Sprague Dawley(SD) 大鼠组织来源背根神经节DRG生长状态贴壁大鼠卫星胶质细胞是胚胎发育过程中起源于神经嵴的特化胶质细胞主要位于大鼠的背根神经节DRG、三叉神经节TG以及周围神经系统PNS的其他感觉神经节、交感神经节和副交感神经节中。它们围绕初级感觉神经元的胞体形成连续的薄细胞鞘每个卫星胶质细胞通常包裹1-2个神经元并通过缝隙连接与相邻的卫星胶质细胞相连以促进细胞间通讯。 细胞来源卫星胶质细胞广泛分布于背根神经节(DRG) 和三叉神经节中这二者是原代培养的主要细胞来源。不同节段的DRG均可作为起始材料。 实验动物选择不同的研究目标可能需要选择不同日龄的动物。现有研究显示以新生大鼠如SD大鼠 为来源的培养方法相对成熟操作过程无需消化细胞自发从组织块中迁出操作更简便。以成年大鼠为来源则能更好地模拟生理和病理状态。 主要培养步骤与纯化鉴定具体的培养步骤如下 具体操作流程组织获取与处理动物处死后在无菌条件下快速分离脊柱暴露并摘取背根神经节DRG。随后在解剖显微镜下仔细剔除DRG上附着的神经纤维、结缔组织和被膜。原代与传代培养将处理好的DRG用缓冲液清洗后直接转移至培养板加入含特定添加剂的专用培养基置于37℃、5% CO₂、饱和湿度的培养箱中培养。培养3天后可见细胞从DRG周围迁移生长。待细胞铺满培养皿底70%-80%时使用胰酶进行消化传代。 细胞纯化为获得高纯度SGCs消化后纯化和迁出法纯化是两种主要的方法消化后纯化将组织消化为单细胞悬液再利用特定标志物如p75 NTR进行免疫磁珠分选MACS或流式细胞分选FACS。迁出法纯化更简便将整个DRG组织块直接培养利用胶质细胞率先迁出的特性可实现95%的极高纯度且无需复杂的消化或分选步骤操作更简便。 细胞鉴定细胞鉴定是验证原代培养成功与否的关键步骤通常通过形态学和免疫学手段进行。形态学观察在倒置显微镜下原代培养的SGCs呈多角形或不规则的成纤维细胞样形态贴壁生长胞体丰满。传代后细胞排列更趋一致。背根神经卫星胶质细胞 x100免疫荧光鉴定常用的SGC特异性标志物包括胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)GFAP免疫荧光鉴定结果 x200S100钙结合蛋白BS100β谷氨酰胺合成酶 (Glutamine Synthetase, GS)是公认的最佳标志物。纯度90%通常被认为是可接受的标准。 培养技术的应用大鼠SGCs原代培养技术已广泛应用于多个前沿研究领域慢性疼痛与神经病理痛研究SGCs在神经损伤和炎症后增生是神经病理痛发生和维持的关键细胞。该模型被用于研究ATP/P2X7信号通路在疼痛传导中的作用以及探索新的镇痛靶点。神经炎症与细胞间通讯研究该模型被用作研究细胞外囊泡EVs的平台揭示其在细胞间信号传递及神经炎症调控中的作用。周围神经再生与修复用于探索SGCs如何参与微环境调控并为神经修复材料如工程化神经移植物的生物相容性与安全性提供细胞水平的评估。细胞功能与分子机制研究结合基因干扰技术如siRNA用于阐明特定基因如Sox2转录因子在SGCs存活、增殖和信号通路调控中的关键作用。武汉云克隆有近二十年的原代细胞研发经验依托GMP级细胞制备平台与专业技术团队不仅构建了丰富来自大、小鼠兔犬猫山羊豚鼠等540多种动物源原代细胞产品体系。更打造了从实验设计、细胞选型、培养操作到数据解读的全链条技术支持服务。